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濟(jì)南免疫親和柱的測(cè)定原理和操作流程

更新時(shí)間:2021-03-21點(diǎn)擊次數(shù):1449
   濟(jì)南免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),B1單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上,樣品中的經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過(guò)免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi),與抗體結(jié)合,洗滌液通過(guò)免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。采用甲醇洗脫,然后進(jìn)行相關(guān)分析。
 
  濟(jì)南免疫親和柱的操作流程:
 ?、贅悠诽幚恚簠⒄崭鞣ǎ瑢?duì)樣品進(jìn)行處理。
 
 ?、趦艋?/div>
  (1)柱子預(yù)處理:取出免疫親和柱,恢復(fù)至室溫,將上端塞子取出,打開(kāi)下端堵頭,將柱內(nèi)保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處,停止流液(或?qū)⒚庖邔游鲋苯舆B接于20ml注射器下)。
 
 ?。?)加樣:加入處理好的樣品液10ml,打開(kāi)下端堵頭,調(diào)節(jié)流速至1-2滴/秒,直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去流出液。
 
  (3)淋洗:液體*排凈后,依次用PBS緩沖液10ml、蒸餾水10ml,淋洗,流速為1-2滴/秒,棄掉流出液,抽干。
 
 ?。?)洗脫:加入色譜級(jí)溶液,調(diào)節(jié)流速為1滴/秒,緩慢洗脫,收集全部洗脫液,用色譜級(jí)溶液定容至1ml(即為凈化后的樣品)。
 
 ?、蹤z測(cè)
  凈化后樣品可直接用HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)等方法進(jìn)行檢測(cè)。
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